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DGGE(一代)
利用PCR-DGGE技术对土壤、环境污泥、水样、动物肠道内容物、酒曲、窖泥等环境中的微生物菌系进行半定量和多样性分析。实验包括:引物设计,基因组DNA电泳图, PCR电泳图, DGGE电泳图,聚类分析图,主成份分析图和多样性分析;DGGE胶图主要条带标注,DGGE胶中特异条带的回收,特异条带PCR扩增,特异条带克隆测序,序列比对分析,种属系统发育分析
DGGE(一代)
利用PCR-DGGE技术对土壤、环境污泥、水样、动物肠道内容物、酒曲、窖泥等环境中的微生物菌系进行半定量和多样性分析。实验包括:引物设计,基因组DNA电泳图, PCR电泳图, DGGE电泳图,聚类分析图,主成份分析图和多样性分析;DGGE胶图主要条带标注,DGGE胶中特异条带的回收,特异条带PCR扩增,特异条带克隆测序,序列比对分析,种属系统发育分析
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高通量扩增子测序(二代)
微生物多样性是基于 Illumina 测序平台,利用双末端测序(Paired-End)的方法, 构建小片段文库进行测序。通过对 Reads 拼接过滤,序列去噪或者OTUs(Operational Taxonomic Units)分组,并进行物种注释及丰度分析,可以揭示样品的物种构成; 进一步进行α多样性分析(Alpha Diversity)、β多样性分析(Beta Diversity)等等,可以挖掘样品之间的差异。
高通量扩增子测序(二代)
微生物多样性是基于 Illumina 测序平台,利用双末端测序(Paired-End)的方法, 构建小片段文库进行测序。通过对 Reads 拼接过滤,序列去噪或者OTUs(Operational Taxonomic Units)分组,并进行物种注释及丰度分析,可以揭示样品的物种构成; 进一步进行α多样性分析(Alpha Diversity)、β多样性分析(Beta Diversity)等等,可以挖掘样品之间的差异。
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全基因组测序(三代)
近年来,随着高通量测序技术的发展,三代测序逐渐成为基因组研究的新兴手段。Pacbio、 Nanopore 等第三代测序技术有效的解决了二代测序读长短,无法跨过基因组高重复区域的问题。当下, Nanopore 测序技术作为三代测序的后起之秀,因其读长长、产出高、价格低的优势开始被广泛应用于测序界。该平台利用纳米孔进行实时测序,没有读长限制,可以直接读取超长片段的序列信息,得到超长的 reads。 Nanopore 测序即纳米孔测序,其原理是:纳米孔蛋白作为生物传感器,插入由合成聚合物形成的膜中。此外,核酸分子会与马达蛋白(Motor Protein)连接,该马达蛋白一方面对双链进行解链,使核酸单链在电泳的作用下通过特定的纳米孔蛋白,另一方面可控制 DNA/RNA 分子的移动速度,保证碱基逐一地穿过纳米孔,产生稳定可靠的电信号。由于不同碱基的带电性质不同,通过检测电信号的差异就能检测出通过纳米孔的碱基类别,实现测序
全基因组测序(三代)
近年来,随着高通量测序技术的发展,三代测序逐渐成为基因组研究的新兴手段。Pacbio、 Nanopore 等第三代测序技术有效的解决了二代测序读长短,无法跨过基因组高重复区域的问题。当下, Nanopore 测序技术作为三代测序的后起之秀,因其读长长、产出高、价格低的优势开始被广泛应用于测序界。该平台利用纳米孔进行实时测序,没有读长限制,可以直接读取超长片段的序列信息,得到超长的 reads。 Nanopore 测序即纳米孔测序,其原理是:纳米孔蛋白作为生物传感器,插入由合成聚合物形成的膜中。此外,核酸分子会与马达蛋白(Motor Protein)连接,该马达蛋白一方面对双链进行解链,使核酸单链在电泳的作用下通过特定的纳米孔蛋白,另一方面可控制 DNA/RNA 分子的移动速度,保证碱基逐一地穿过纳米孔,产生稳定可靠的电信号。由于不同碱基的带电性质不同,通过检测电信号的差异就能检测出通过纳米孔的碱基类别,实现测序
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16S rDNA文库构建
使用PCR方法扩增特定环境样品中混合细菌16S rDNA,使用TA克隆方法构建细菌16S rDNA文库,挑选阳性克隆测定细菌16S rDNA部分序列,并与GenBank中已知序列进行同源性比较,获得特定环境中的细菌群落结构和细菌多样性信息。
16S rDNA文库构建
使用PCR方法扩增特定环境样品中混合细菌16S rDNA,使用TA克隆方法构建细菌16S rDNA文库,挑选阳性克隆测定细菌16S rDNA部分序列,并与GenBank中已知序列进行同源性比较,获得特定环境中的细菌群落结构和细菌多样性信息。
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RFLP限制性片段长度多态性
RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism,限制片段长度多态性),是用特异性引物对混合微生物群体DNA提取物进行PCR扩增,然后用适当的限制性内切酶对扩增产物进行 消化,由于序列的差异,呈现酶切图谱的 DNA多态性。该方法已被广泛用于基因组遗传图谱构建、基因定位以及生物进化和分类的研究。T-RFLP技术依据细菌16S rRNA基因保守区设计通用引物,以待分析样品DNA为模板进行PCR扩增,所得到的PCR产物采用特定的的限制性内切酶进行酶切。由于在细菌之间16S rRNA序列中核苷酸序列的差异,酶切后会产生很多不同长度的限制性片段。通过检测分析这些酶切片段大小即可反应微生物群落组成情况。
RFLP限制性片段长度多态性
RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism,限制片段长度多态性),是用特异性引物对混合微生物群体DNA提取物进行PCR扩增,然后用适当的限制性内切酶对扩增产物进行 消化,由于序列的差异,呈现酶切图谱的 DNA多态性。该方法已被广泛用于基因组遗传图谱构建、基因定位以及生物进化和分类的研究。T-RFLP技术依据细菌16S rRNA基因保守区设计通用引物,以待分析样品DNA为模板进行PCR扩增,所得到的PCR产物采用特定的的限制性内切酶进行酶切。由于在细菌之间16S rRNA序列中核苷酸序列的差异,酶切后会产生很多不同长度的限制性片段。通过检测分析这些酶切片段大小即可反应微生物群落组成情况。

